מאָלעקולאַר בייאַלאַדזשיקאַל פאָרשונג מעטהאָדס און זייער נוצן

מאָלעקולאַר בייאַלאַדזשיקאַל פאָרשונג מעטהאָדס שפּילן אַ וויכטיק ראָלע אין מאָדערן מעדיצין, פאָרענסיק וויסנשאַפֿט, און ביאָלאָגי. רעכט צו אַדוואַנסיז אין דעם לערנען פון דנאַ און רנאַ, דער מענטש איז ביכולת צו ויספאָרשן די דזשינאָום פון די אָרגאַניזם באַשטימען די קאַוסאַטיווע אַגענט, צו דערקענען די געבעטן נוקלעיק זויער אין אַ געמיש פון אַסאַדז, אאז"ו ו

מאָלעקולאַר-בייאַלאַדזשיקאַל מעטהאָדס. וואָס איז עס?

אַפֿילו אין די 70-80-יעס סייאַנטיס איז געווען דער ערשטער צו דעסיפער די מענטשלעך דזשינאָום. דאס געשעעניש האט ימפּאַטאַס צו דער אַנטוויקלונג פון גענעטיק ינזשעניעריע און מאָלעקולאַר ביאָלאָגי. לערנען פון פּראָפּערטיעס פון דנאַ און רנאַ האט ריזאַלטאַד אין וואָס איז איצט מעגלעך צו נוצן די נוקלעיק אַסאַדז פֿאַר דעם ציל פון קרענק דיאַגנאָסיס, לערנען דזשין.

צוגרייטונג פון דנאַ און רנאַ

מאָלעקולאַר בייאַלאַדזשיקאַל דיאַגנאָסטיק מעטהאָדס דאַרפן סטאַרטינג מאַטעריאַל: אָפֿט דעם נוקלעיק זויער. עס זענען עטלעכע דרכים צו סעלעקטירן די סאַבסטאַנסיז פון די סעלז פון לעבעדיק אָרגאַניזאַמז. יעדער האט זייַן אַדוואַנידזשיז און דיסאַדוואַנטידזשיז, און עס זאָל זיין געהאלטן ווען טשוזינג אַ אופֿן פון ייסאַלייטינג נוקלעיק אַסאַדז אין ריין פאָרעם.

1. צוגרייטונג פון די דנאַ דורך מאַרמור. דער אופֿן באשטייט אין טרעאַטינג די געמיש פון אַלקאָהאָל סאַבסטאַנסיז, פּרעסיפּיטאַטעס ריזאַלטינג ריין דנאַ. די דאַונסייד פון דעם אופֿן איז די נוצן פון קעראָוסיוו סאַבסטאַנסיז, פענאָל און טשלאָראָפאָרם.

2. יסאָלאַטיאָן פון דנאַ אויף די בום. די הויפּט מאַטעריע אַז איז געניצט דאָ - איז גואַנידינע טהיאָסיאַנאַטע (גוסקן). עס פּראַמאָוץ די דעפּאַזישאַן פון דעאָקסיריבאָנוקלעיק זויער אויף ספּעשאַלייזד סאַבסטרייץ, פֿון וואָס עס קענען זיין דערנאָך געזאמלט דורך מיטל פון אַ ספּעציעל רשימה. אָבער גוסקן - איז אַ ינכיבאַטער פון די טקפּ, און אַפֿילו אַ קליין חלק פון אַז געץ דיפּאַזאַטאַד אין די דנאַ קענען השפּעה די לויף פון די פּאָלימעראַסע קייט אָפּרוף, וואָס איז וויכטיק ווען ארבעטן מיט נוקלעיק אַסאַדז.

3. Precipitation פון ימפּיוראַטיז. דער אופֿן דיפפערס פֿון פֿריִערדיקע אָנעס אין אַז די מאַלאַקיולז זיך זענען נישט דיפּאַזאַטאַד דעהאָקסיריבאָנוקלעינאָוווי זויער און ימפּיוראַטיז. צו טאָן דאָס, נוצן די יאָן יקסטשיינדזשערז. די כיסאָרן איז אַז ניט אַלע סאַבסטאַנסיז קענען פאַרענטפערן.

4. מאַסע זיפּונג. דעם אופֿן איז געניצט אין קאַסעס, ווען איר טאָן ניט דאַרפֿן צו האָבן פּינטלעך אינפֿאָרמאַציע וועגן די ביניען פון די דנאַ מאַלאַקיול, און דער דאַרפֿן צו באַקומען עטלעכע סטאַטיסטיק. די סיבה איז אַז די נוקלעיק זויער ביניען קענען זיין דאַמידזשד ווען האַנדלינג דיטערדזשאַנץ, דער הויפּט אַלקאַליעס.

גריידינג פון פאָרשונג מעטהאָדס

אַלע מאָלעקולאַר-בייאַלאַדזשיקאַל מעטהאָדס פון פאָרשונג זענען צעטיילט אין דרייַ הויפּט גרופּעס:

1. פאַרברייטערונג (ניצן אַ פּלוראַליטעט פון ענזימעס). דעם כולל פּקר - פּאָלימעראַסע קייט אָפּרוף, וואָס plays אַ וויכטיק ראָלע אין פילע פון די דייאַגנאַסטיקס.

2. נעאַמפּליפיקאַציאָנניע. די גרופּע פון מעטהאָדס איז פֿאַרבונדן גלייַך מיט די אַרבעט פון נוקלעיק זויער מיקסטשערז. עקסאַמפּלעס זענען 3 מינים בלאַץ, אין סיטו היברידיזאַטיאָן, אאז"ו ו

3. מעטהאָדס באזירט אויף די דערקענונג פון דער סיגנאַל פון די זאָנד מאַלאַקיול, וואָס ביינדז צו אַ ספּעציפיש דנאַ אָדער רנאַ זאָנד. משל - היברידיזאַטיאָן סיסטעם היברידע קאַפּטורע סיסטעם לייזונג (הק2).

ענזימעס אַז קענען ווערן געניצט אין מאָלעקולאַר בייאַלאַדזשיקאַל פאָרשונג מעטהאָדס

פילע מאָלעקולאַר דיאַגנאָסטיק טעקניקס אַרייַנציען די נוצן פון ברייט קייט פון ענזימעס. ונטער זענען געניצט רובֿ אָפט:

1. ריסטריקשאַן ענזיים - "שנייַדן" די דנאַ מאַלאַקיולז צו די נייטיק טיילן.

2. דנאַ פּאָלימעראַסע - סינטהעסיזעס אַ טאָפּל-סטראַנדאַד דעאָקסיריבאָנוקלעיק זויער מאַלאַקיול.

3. ריווערס טראַנסקריפּטאַסע (פאַרקערט טראַנסקריפּטאַסע) - געניצט צו סינטאַסייז דנאַ פון אַ רנאַ מוסטער.

4. דנאַ ליגאַסע - איז פאַראַנטוואָרטלעך פֿאַר די פאָרמירונג פון פאָספאָדיעסטער קייטן צווישן נוקלעאָטידעס.

5. עקסאָנוקלעאַסע - רימוווז נוקלעאָטידעס פֿון די סוף פּאָרשאַנז פון די דעאָקסיריבאָנוקלעיק זויער מאַלאַקיול.

פּקר - דעם יקערדיק אופֿן פון דנאַ פאַרברייטערונג

פּאָלימעראַסע קייט רעאַקציע (פּקר) איז אַקטיוולי געניצט מאָדערן מאָלעקולאַר ביאָלאָגי. דעם אופֿן, אין וואָס אַ איין דנאַ מאַלאַקיולז קענען זיין באקומען אַ גרויס נומער פון קאָפּיעס (אַמפּליפיינג מאַלאַקיול).

יקערדיק פֿונקציע פון פּקר:

- דיאַגנאָסיס פון חולאתן;

- קלאָונינג דנאַ סעגמאַנץ, גענע.

צו פירן אויס די פּאָלימעראַסע קייט אָפּרוף ריקווייערז די ווייַטערדיק עלעמענטן: ערשט דנאַ מאַלאַקיולז, טהערמאַללי סטאַביל דנאַ פּאָלימעראַסע (טאַק אָדער פּפו), דעאָקסיריבאָנוקלעאָטידע פאָספאַטעס (קוואלן ניטראָגען באַזע), פּריימערז (2 אָנפאַנגער 1 דנאַ מאַלאַקיולז) און זיך אַ Buffer סיסטעם וואָס איז מעגלעך צו אָנפירן אַלע ריאַקשאַנז.

פּקר באשטייט פון דרייַ טריט: דענאַטוראַטיאָן, אָנפאַנגער אַנילינג און ילאָנגגיישאַן.

1. דענאַטוראַטיאָן. אין אַ טעמפּעראַטור פון 94-95 דיגריז סעלסיוס פּראָשאָדיט בראָך פון הידראָגען קייטן צווישן דער צוויי קייטן פון דנאַ, און ווי אַ רעזולטאַט מיר באַקומען צוויי איין-סטראַנדיד מאַלאַקיולז.

2. אַננעאַלעד פּריימערז. אין אַ טעמפּעראַטור פון 50-60 דיגריז סענטיגראַדע אַקערז אַקסעשאַן פּריימערז ביי די ענדס פון איין-סטראַנדיד נוקלעיק זויער מאַלאַקיולז לויט צו דעם טיפּ פון קאָמפּלעמענטאַריטי.

3. עלאָנגאַטיאָן. אין אַ טעמפּעראַטור פון 72 דיגריז איז סינטיסייזד טאָכטער טאָפּל סטראַנדיד דעאָקסיריבאָנוקלעיק זויער מאַלאַקיולז.

דנאַ סיקוואַנסינג

מאָלעקולאַר בייאַלאַדזשיקאַל פאָרשונג מעטהאָדס אָפֿט דאַרפן וויסן פון די סיקוואַנס פון נוקלעאָטידעס אין אַ מאַלאַקיול פון דעאָקסיריבאָנוקלעיק זויער. צו באַשטימען דעם גענעטיק קאָד סעקווענסעד. מאָלעקולאַר דייאַגנאַסטיקס פון די צוקונפֿט וועט זיין באזירט אויף די וויסן גאַינעד אין די פעסטקייַט פון די מענטשלעך סיקוואַנס.

די ווייַטערדיק טייפּס פון סיקוואַנסינג:

• סיקוואַנסינג דורך די מאַקסאַם-גילבערט;
• לידער סיקוואַנסינג;
• פּיראָסעקווענסינג;
• נאַנאָפּאָראָוואָע סיקוואַנסינג.